無菌檢查、微生物限度檢查的所有操作均需在嚴格控制微生物污染的環(huán)境下進行，操作環(huán)境的無菌保證程度將直接影響無菌檢查結(jié)果，為了保證無菌檢查用潔凈室（區(qū)）環(huán)境的穩(wěn)定性，確保檢查結(jié)果的可靠性，對潔凈室（區(qū)）的環(huán)境質(zhì)量采取合理的控制措施和評價方法是必要的。無菌檢查、微生物限度檢查應在環(huán)境潔凈度10000級和局部潔凈度100級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進行，其全過程必須嚴格遵守無菌操作，防止微生物污染。單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標準進行潔凈度驗證。隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進行驗證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。

無菌室應采光良好、避免潮濕、遠離廁所及污染區(qū)。面積一般不超過10平方米，不小于5平方米；高度不超過2.4m。由1~2 個緩沖間、操作間組成（操作間和緩沖間的門不應直對），操作間與緩沖間之間應具備滅菌功能的樣品傳遞箱。在緩沖間內(nèi)應有洗手盆、毛巾、無菌衣褲放置架及掛鉤、拖鞋等，不應放置培養(yǎng)箱和其他雜物；無菌室內(nèi)應六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墻壁與地面、天花板連接處應呈凹弧形，無縫隙，不留死角。操作間內(nèi)不應安裝下水道。

無菌操作室應具有空氣除菌過濾的單向流空氣裝置，操作區(qū)潔凈度100級或放置同等級別的超凈工作臺，室內(nèi)溫度控制18~26℃，相對濕度45%~65%。緩沖間及操作室內(nèi)均應設置能達到空氣消毒效果的紫外燈或其他適宜的消毒裝置，空氣潔凈級別不同的相鄰房間之間的靜壓差應大于5Pa，潔凈室（區(qū)）與室外大氣的靜壓差大于10Pa。無菌室內(nèi)的照明燈應嵌裝在天花板內(nèi)，室內(nèi)光照應分布均勻，光照度不低于300lx。緩沖間和操作間所設置的紫外線殺菌燈（2~2.5W/平方米），應定期檢查輻射強度，要求在操作面上達40/μW/平方厘米，不符合要求的紫外殺菌燈應及時更換。

無菌室應每周和每次操作前用0.1%新潔爾滅或2%甲酚液或其他適宜消毒液擦拭操作臺及可能污染的死角，開啟無菌空氣過濾器及紫外燈殺菌1小時。在每次操作完畢，同樣用上述消毒溶液擦拭工作臺面，除去室內(nèi)濕氣，用紫外燈殺菌半小時。

無菌室的潔凈度檢查無菌室在消毒處理后，無菌試驗前及操作過程中需檢查空氣中菌落數(shù)，以此來判斷無菌室是否達到規(guī)定的潔凈度，常有沉降菌和浮游菌測定方法。

沉降菌檢測方法及標準；以無菌方式將3個營養(yǎng)瓊脂平板帶入無菌操作室，在操作區(qū)臺面左、中、右各放1個；打開碟蓋扣置，平板在空氣中暴露30分鐘后將碟蓋蓋好，置32.5℃±2.5℃培養(yǎng)48小時，取出檢查，3個平板上生長的菌落數(shù)平均不超過1個。

浮游菌檢測方法及標準：用專門的采樣器，宜采用撞擊法機理的采樣器，一般采用狹縫式或離心式采樣器，并配有流量計和定時器，嚴格按儀器說明書的要求操作并定期校驗，采樣器和培養(yǎng)皿進入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，使用的培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或藥典認可的其它培養(yǎng)基。使用時，先開動真空泵抽氣，時間不少于5分鐘，調(diào)節(jié)流量、轉(zhuǎn)盤、轉(zhuǎn)速。關(guān)閉真空泵，放入培養(yǎng)皿，蓋上采樣器蓋子后調(diào)節(jié)縫隙高度。置采樣口于采樣點后，依次開啟采樣器、真空泵，轉(zhuǎn)動定時器，根據(jù)采樣量設定采樣時間。全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿置32.5℃±2.5℃培養(yǎng)48小時，取出檢查，浮游菌落數(shù)平均不得過5個/平方米。

每批培養(yǎng)基應選定3只培養(yǎng)皿做對照培養(yǎng)。
無菌操作臺面或超凈工作臺還應定期請有關(guān)部門檢測其懸浮粒子，應達到100級（一般用塵埃粒子計數(shù)儀）檢測塵埃粒徑≥0.5μm的粒數(shù)不得超過3.5個/升，≥5μm的粒數(shù)為0，空氣流速應≥0.35m/s，可根據(jù)無菌狀況必要時置換過濾器。